ABSTRACT
A endodontia e medicina regenerativa têm demonstrado grande interesse no potencial proliferativo e de diferenciação das Células-tronco de Papila Apical (SCAP), sendo que muitos estudos têm sido direcionados a avaliar as citocinas produzidas por tal população celular. No entanto, o suplemento mais comumente utilizado nos meios de cultura, o Soro Bovino Fetal (SBF), apresenta uma composição complexa e não totalmente conhecida, podendo interferir em diferentes fenômenos, sendo um deles a produção in vitro de citocinas pelas células. Portanto, este estudo teve como proposição: 1. avaliar a interferência do SBF na viabilidade celular das SCAP ativadas ou não por lipopolissacarídeo de Escherichia Coli (LPS) e 2. verificar a interferência de diferentes concentrações de SBF na produção das citocinas Interleucina (IL)-6, Fator de Crescimento Transformador (TGF)-1, Osteoprotegerina (OPG) e a quimiocina CCL2 no sobrenadante das SCAP ativadas por LPS. As células, previamente caracterizadas, obtidas do Biobanco da FOUSP, foram cultivadas em meio -MEM a 10% de SBF, plaqueadas e, após 24h, 48h, 72h, 7 e 14 dias de estímulo, foram então submetidas ao ensaio de MTT para a avaliação da viabilidade celular. A quantificação das citocinas foi realizada através do ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA), no tempo experimental de 24h. Os grupos foram organizados em triplicata de acordo com a concentração de SBF e presença ou não de LPS (1 g/mL). A análise estatística foi executada aplicando-se a análise de variância a dois critérios (two-way ANOVA) seguida de pós-teste de Tukey com nível de significância de 5%. Em 24h, as SCAP cultivadas em meio suplementado com qualquer concentração de SBF apresentaram maior metabolismo celular comparadas àquelas na ausência de soro. Para os tempos experimentais mais longos, de 7 e 14 dias, as SCAP ativadas por LPS mostraram um aumento significativo na viabilidade celular quanto cultivadas sob 10 e 15% de SBF. As duas concentrações testadas de SBF (1 e 10%) interferiram na produção de todas as citocinas avaliadas no presente estudo. Esse resultado enfatiza a importância de evitar a suplementação com SBF em estudos de detecção de citocinas envolvendo SCAP.
Subject(s)
Serum Albumin, Bovine , CytokinesABSTRACT
Abstract Fetal bovine serum (FBS) is the most used supplement in culture media; however, it may interfere with in vitro assays via effects on cell proliferation and cytokine production. The ideal FBS concentration for assays using apical papilla cells (APCs) remains unknown. Therefore, this study aimed to evaluate the effects of FBS on APC activation, cell viability/proliferation, and cytokine production. Methodology Human APCs were cultured, plated, and maintained in media containing increasing concentrations of FBS for 24 h, 48 h, 72 h, 7 days, and 14 days in the presence of Lipopolysaccharide (LPS - 1 µg/mL). At each time point, the cells were subjected to the MTT assay. The cytokines transforming growth factor (TGF)-β1, osteoprotegerin (OPG), and interleukin (IL)-6, along with the chemokine CCL2, were quantified using the enzyme-linked immunosorbent assay at the 24-h time-point. Statistical analysis was performed using two-way analysis of variance (ANOVA) followed by Tukey's post-hoc test (p<0.05). Results In general, APCs exhibited increasing metabolic activity in an FBS concentration-dependent fashion, regardless of the presence of LPS. In contrast, FBS interfered with the production of all the cytokines evaluated in this study, affecting the response induced by the presence of LPS. Conclusion FBS increased APC metabolism in a concentration-dependent manner and differentially affected the production of TGF-β1, OPG, IL-6, and CCL2 by APCs in vitro.